1.3样品前处理准确称取5.0g经100目筛分、混合均匀的样品于60mL梨形锥形瓶中，向锥形瓶中加入20mL正己烷和二氯甲烷(1∶1)溶液，同时加入1.0g铜粉。
因此基于上述特性，初步确定DT06色素是一种多羟基化合物。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。
（2）光照的影响如图4b所示，在黑暗和日光条件下放置5d，色素吸光度值基本没变化;在紫外和12000LX条件下照射5d后，色素保存率分别为96.2%和94.2%，说明色素具有良好的光稳定性。2、色素抗氧化性如图3所示，在0～0.5mg／mL浓度范围内，随着色素浓度的增加，自由基清除率逐渐增加，当浓度为0.5mg／mL时，色素对自由基离子有最大的清除率，并且色素对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧自由基及羟基自由基清除率IC50。色素溶液pH为8时，5d后色素保存率为72.4％。溶于水并且酸性条件稳定而碱性条件沉淀，说明其分子结构中含有多个羟基。X4、X2对色素产生负效应的影响。
3、色素的稳定性分析（1）温度的影响如图4a所示，黄色素在4℃和20℃保存5d后，其吸光度值基本没变化;随着温度升高，吸光度值略有下降，但在100℃条件下保存5d后，保存率仍在86%以上，说明黄色素热稳定性较好。4、PB实验设计结果与分析采用Minitabl7软件对各因素进行PB试验设计，结果如表1所示，各因素回归系数和显著性排序如表2所示，结果表明：NaNO3(X2)、MgSO47H2O(X4)、CS(X6)的含量对色素产量影响显著，其中X6对色素产生正效应的影响。DHJK-2020低温冷却循环泵，郑州科泰实验设备有限公司。
纽莫康定B0的结构式为2.2 HPLC(高效液相色谱)法测定C0检测方法为公司自行开发，线性梯度洗脱程序如表1所示。Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技。Welch Ultimate HILIC Amide柱，4.6 mm250 mm， 3.5 m; 波长220 nm， 流量1.0 mL/min， 进样量10 L，柱温40 ℃，流动相A为水，流动相B为乙腈。R-1001N型旋转蒸发仪，郑州长城科工贸有限公司。
色谱分离法在化合物的分离中应用较为广泛，且色谱纯度、回收率和分离效率等方面远远优于传统的制备方法，其中色谱纯度通过面积归一化法得到。SCIENTZ-12ND冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司。
由于C0为B0生产过程中的关键杂质，在生产纯化过程中去除C0有一定的难度。因此，开发出一种有效的方法得到高纯度的纽莫康定B0对于后续合成卡泊芬净尤为重要。作为合成真菌药物卡泊芬净的中间体，纽莫康定B0由真菌Zalerion arboricola发酵产生，发酵过程中会产生与纽莫康定B0结构相近的副产物及大量的色素。以纽莫康定B0对照品进行外标法定量。
笔者以实验室制得的纽莫康定B0粗品为原料，通过高压制备对纽莫康定B0进行了放大中试研究，开发出了一种生产周期短、成本低和色谱纯度高的制备工艺。2 实 验2.1 HPLC(高效液相色谱)法测定B0纽莫康定B0检测方法：Thermo Hypersil GOLD C18，4.6 mm250 mm， 5 m; 以V(乙腈)∶V(水)=45∶55为流动相，等度洗脱。相比于中低压色谱制备，高压色谱制备效率高、柱效高。1 仪器与试药1.1 仪 器U3000高效液相色谱仪，赛默飞Thermo公司。
SHB-B95型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。纽莫康定B0粗品，鲁南新时代生物技术有限公司提供，质量分数81.20%;纽莫康定B0对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司，质量分数95.56%，批号16001;纽莫康定C0对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司赠与，质量分数95.11%，批号16002;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。
以纽莫康定C0对照品进行外标法定量，纽莫康定C0对照品溶液的配制与纽莫康定B0对照品溶液的配制相同三、结论本实验以玛咖为原料，利用三相萃取法提取玛咖多糖，优化提取工艺。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：玛咖多糖，叔丁醇，自由基。经过单因素实验以及响应面实验优化后，最佳提取工艺为（NH4）2SO4添加量为30%，叔丁醇添加量为10mL，萃取温度为37℃，提取次数1次，此工艺条件下玛咖多糖的提取率能达到45.3%。但是考虑到实验条件的可操作性，将提取条件设定为（NH4）2SO4添加量30%，叔丁醇添加量10mL，萃取温度37℃，按实验步骤进行实验得到的玛咖多糖提取率为45.3%，与理论值45.92%吻合程度较高，说明了模型的可靠性，证明用响应面优化玛咖多糖提取方案具有一定的实际应用价值。3、响应面直观分析Design-Expert处理得到响应面的分析结果见图5～7。这为以后将玛咖多糖开发成为具有抗疲劳、抗氧化、增强免疫功能的保健功能食品，提供一定的科学依据和研究基础。
玛咖多糖的OH和DPPH自由基清除能力实验表明，玛咖多糖对两者均具有很强的清除能力，说明玛咖多糖具有一定的抗氧化能力，三相萃取法工艺也很好地保存了玛咖多糖的活性。6、玛咖多糖清除OH以及DPPH的能力由图9、图10可知，玛咖多糖对OH自由基清除率以及DPPH自由基清除率随玛咖多糖浓度增加而增大，这两种自由基清除率越高说明玛咖多糖的抗氧化能力就越强，玛咖多糖对OH自由基清除率的半数清除率IC50值为2.5mg/mL，对DPPH清除率的半数清除率IC50值能达到11.6mg/mL，说明玛咖多糖对羟基自由基以及DPPH自由基都有很强的清除能力，也说明此三相萃取法工艺能够很好地保存了玛咖多糖的活性。
结果如图5、图6、图7所示，响应面的直观分析得到的玛咖多糖最佳提取条件为：（NH4）2SO4添加量30%，叔丁醇添加量10.3mL，萃取温度36.8℃，理论提取率能达到45.92%经过单因素实验以及响应面实验优化后，最佳提取工艺为（NH4）2SO4添加量为30%，叔丁醇添加量为10mL，萃取温度为37℃，提取次数1次，此工艺条件下玛咖多糖的提取率能达到45.3%。
3、响应面直观分析Design-Expert处理得到响应面的分析结果见图5～7。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。
三、结论本实验以玛咖为原料，利用三相萃取法提取玛咖多糖，优化提取工艺。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：玛咖多糖，叔丁醇，自由基。但是考虑到实验条件的可操作性，将提取条件设定为（NH4）2SO4添加量30%，叔丁醇添加量10mL，萃取温度37℃，按实验步骤进行实验得到的玛咖多糖提取率为45.3%，与理论值45.92%吻合程度较高，说明了模型的可靠性，证明用响应面优化玛咖多糖提取方案具有一定的实际应用价值。玛咖多糖的OH和DPPH自由基清除能力实验表明，玛咖多糖对两者均具有很强的清除能力，说明玛咖多糖具有一定的抗氧化能力，三相萃取法工艺也很好地保存了玛咖多糖的活性。
6、玛咖多糖清除OH以及DPPH的能力由图9、图10可知，玛咖多糖对OH自由基清除率以及DPPH自由基清除率随玛咖多糖浓度增加而增大，这两种自由基清除率越高说明玛咖多糖的抗氧化能力就越强，玛咖多糖对OH自由基清除率的半数清除率IC50值为2.5mg/mL，对DPPH清除率的半数清除率IC50值能达到11.6mg/mL，说明玛咖多糖对羟基自由基以及DPPH自由基都有很强的清除能力，也说明此三相萃取法工艺能够很好地保存了玛咖多糖的活性。结果如图5、图6、图7所示，响应面的直观分析得到的玛咖多糖最佳提取条件为：（NH4）2SO4添加量30%，叔丁醇添加量10.3mL，萃取温度36.8℃，理论提取率能达到45.92%。
这为以后将玛咖多糖开发成为具有抗疲劳、抗氧化、增强免疫功能的保健功能食品，提供一定的科学依据和研究基础其中A-（NH4）2SO4添加量，B-叔丁醇添加量对响应值影响显著（P＜0.05），B2、C2对响应值影响极显著（P＜0.01），各个因素对玛咖多糖得率影响大小顺序依次为：叔丁醇添加量（B）＞（NH4）2SO4添加量（A）＞萃取温度（C）。
（2）叔丁醇添加量对玛咖多糖提取率的影响由图2可知，随着叔丁醇添加量的增加，玛咖多糖的提取率也相应增加，在叔丁醇添加量在5mL～10mL之间，玛咖多糖提取率增加幅度较大，这可能是由于增加叔丁醇的含量和（NH4）2SO4的含量引起相互作用的结果，导致多糖提取率的增加。当萃取温度超过40℃以后，玛咖多糖的提取率出现下降，这可能温度增加超过一定范围后，虽然多糖分子的热运动速度增加了，但是与其他物质间的反应以及反应速率也在增加，提取出的玛咖多糖颜色也在加深，说明高温对玛咖多糖的活性也有影响，所以选择提取温度20℃～40℃进行响应面优化实验。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。（4）水提次数对玛咖多糖提取率的影响由图4可知，蒸馏水提次数对玛咖多糖的提取率影响不大，在提取1～4次范围内，多糖提取率都在42%左右波动。（3）萃取温度对玛咖多糖提取率的影响由图3可知，当玛咖多糖萃取温度在20℃～40℃之间逐渐增加时，玛咖多糖的提取率34.3%增加至41.5%，这可能是因为温度的增加让三相萃取溶液体系中分子热运动加快，这样玛咖多糖更容易从玛咖粉中进入到萃取溶液中，从而玛咖多糖的提取率增加。2、响应面优化实验由Design-Expert软件处理数据，方差分析结果见表2。
对响应值与各个因素进行回归拟合，该模型对应的回归方程：多糖提取率=43.4+1.6A+1.8B+1.2C-0.83AB-1.48AC0.33BC-2.14A2-7.79B2-4.24C2由表3结果可知，整体模型P值＜0.01，说明此时回归方差模型极显著，该试验方法可靠。提取1次时，多糖提取率最低，为41.6%。
从节约和经济的角度考虑，将提取次数定为1次，考虑到提取次数对玛咖多糖提取影响不明显，故而在响应面试验中提取次数不作为考察因子进行考虑。但是当叔丁醇添加量超过15mL后，玛咖多糖的提取率大幅下降，这可能是叔丁醇的含量过高不利于三相体系的稳定性，所以初步选择玛咖多糖的叔丁醇添加量在5～15mL之间。
如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：叔丁醇，玛咖多糖，三相萃取。方程失拟项也极显著，该回归模型与实测值能较好的拟合。
